細菌內毒素檢查法（BET）是利用鱟試劑來檢測供試品中細菌內毒素的限量是否符合規定的一種方法，擁有操作簡單、靈敏度高、專屬性強、試驗結果易判斷等優點， 因而被廣泛應用于藥品、醫療器械、臨床醫學研究，各種水源、食品、動物飼料等方面的體外內毒素檢查。BET的反應機理是一系列的酶促反應，任何影響反應機制因素的干擾，都會導致檢查結果的異常。特別是近些年生物醫藥的樣本組分越發復雜，對去除內毒素檢測干擾提出更大的挑戰。

廈門鱟生科·BIOENDO給大家整理了以下檢測樣本時可能產生干擾的因素都有哪些：

環境內毒素無處不在，操作環境及操作不當可使在操作過程中帶來污染，所用器具處理不當，被外來的內毒素污染，都很容易導致假陽性結果。因此BET應在符合規定的凈化間或操作臺進行，盡量防止外源性內毒素的污染。所用器材應清洗干凈，用酸、堿洗液或洗滌劑清洗后, 應反復沖洗干凈，避免殘留的內毒素。如玻璃容器須在250℃干熱滅活至少30min。采樣用注射器及吸管應有良好的精密度，玻璃容器材質應選用耐酸、堿的硬質玻璃，膠管、膠塞應使用優質醫用產品。實驗所接觸的器皿耗材均要無內毒素，以避免外源引入污染。操作人員在試驗過程中勿大聲講話和急速行動，防止塵埃和唾液濺入檢品中。

供試品的種類不同，對于BET的干擾因素不同，下面列舉了幾種常見的干擾因素及其解決方式。

二價陽離子：二價陽離子濃度不足(如Mg²⁺離子)，內毒素無法激活鱟試劑中的酶，反應被抑制。可通過使用鈣鎂離子添加劑（BY01）解決，注意過高的二價陽離子（如Ca²⁺）濃度可能會對試驗帶來抑制作用。

高滲透壓：較高濃度的糖或鹽通常會抑制BET，可使用BET水在允許范圍內進行稀釋消除干擾。

酶、酶抑制劑：供試品若含有絲氨酸蛋白酶會增強反應，若含有絲氨酸蛋白酶抑制劑會抑制反應。通常的消除干擾的方式為：使用BET水或廠家提供的樣本處理液（ST09）稀釋10倍，然后75℃加熱10分鐘，冷卻至室溫后再檢測。

非內毒素反應物：β-葡聚糖會造成實驗結果假陽性，可使用G因子抑制劑（BT02）消除干擾。或使用內毒素檢測試驗進行檢測。

洗滌劑：高濃度的洗滌劑會使鱟試劑的蛋白失活，可對供試品進行稀釋降低干擾。

油脂類：脂類包裹內毒素，使內毒素無法暴露出來，實驗結果將出現假陰性，可通過添加分散劑（PBS50）的方式去除干擾。

一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內為宜，pH值過高或過低，均可抑制鱟試劑與內毒素的反應， 使鱟試劑靈敏度下降。可以通過酸堿緩沖液（BH02）調節供試品的pH值，使其處于最佳的pH范圍。

《中國藥典》規定鱟試驗反應溫度在37±1℃，凝膠法試驗需要注意溫育時間60±2min。溫度過低，凝膠化推遲，溫度過高則破壞鱟試劑，阻止凝膠反應；延長溫育時間， 則提高了鱟試劑的靈敏度，易出現假陽性。光度法、重組C因子熒光法、重組級聯試劑顯色法(RCR0428)需要注意檢測設備（鱟試驗微生物快速檢測系統ELx808IU-SN）溫控性能。

凝膠法試驗在溫育過程和取放安瓿時要小心避免振動造成假陰性。

BET結果會受多種因素的干擾，造成結果異常。我們在實驗過程中，應按藥典規定的操作規程、實驗條件、廠家專業培訓指導，排除各種干擾因素，保證實驗結果準確可靠。

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