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透明質酸鈉注射液細菌內毒素檢查法的研究

潘衛松1 ，肖 瑛 2

（1.廣州市藥品檢驗所 ，廣東廣州510610；2.暨南大學藥學院 ，廣東廣州510632）

[摘 要]

目的：建立透明質酸鈉注射液的細菌內毒素檢查法。

方法：按2005版《中國藥典》二部中的“細菌內毒素檢查法”，用不同廠家的鱟試劑對不同批號的透明質酸鈉注射液分別進行干擾試驗。

結果：透明質酸鈉注射液的檢測濃度≤5 mg/ml時對細菌內毒素檢查法無干擾。結論：透明質酸鈉注射液按限值 L=0.05 EU/ml 進行細菌內毒素檢查是可行的。

[關鍵詞] 透明質酸鈉注射液；細菌內毒素檢查法；鱟試劑；干擾試驗

透明質酸鈉是廣泛存在于人體內的生理活性物質，是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基乙糖組成雙糖單位聚合而成的一種黏多糖。透明質酸鈉注射液是透明質酸的注射用制劑，關節腔內注射可用于變形膝關節病和肩關節周圍炎的輔助治療，關節腔內給予外源性的透明質酸鈉，可保護軟骨、抑制炎癥反應、利于軟骨修復、改善潤滑功能，從而可以緩解癥狀，增加關節活動度[1]。透明質酸鈉注射液也可作為眼科手術輔助用藥，前房內注射可用于白內障囊內、囊外摘除術，抗青光眼手術，角膜移植手術等，也可用于術后腸粘連[2]。為探討采用細菌內毒素檢查法檢測透明質酸鈉注射液的可行性，筆者參照 2005 版《中國藥典》二部中“細菌內毒素檢查法”的應用指導原則，對本品進行了細菌內毒素檢查方法學的研究，現報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

SUB14 恒溫水浴鍋；MSI旋渦混合器。

1.2 試藥

細菌內毒素工作標準品（規格：140 EU/支，批號：150601- 200758）及細菌內毒素檢查用水（BET 水，規格：50 ml/支，批號 0612130）；
鱟試劑（TAL）A 0.1 ml/支 ，批號 ：0802201，靈敏度：0.25 EU/ml）；
鱟試劑TAL B（廈門市鱟試劑實驗廠有限公司，規格：0.1 ml/支，批號：080103，靈敏度：0.25 EU/ml）；
透明質酸鈉注射液（規格：2 ml∶20 mg，批號：096200、095910、095600、112800、113300、113700）。

2 方法與結果

2.1 細菌內毒素限值的確定

根據企業所附標準：透明質酸鈉注射液細菌內毒素限值為0.05 EU/mg。

2.2 鱟試劑靈敏度復核試驗

按照2005 版《中國藥典》二部附錄“細菌內毒素檢查法”規定，進行鱟試劑的標示靈敏度（λ）復核。結果見表1。

由表1可見，2批鱟試劑經細菌內毒素工作標準品檢查，λC均在0.5λ～2.0λ之間，結果均符合規定。

2.3 干擾預試驗[3]

2.3.1 熒光素鈉注射液有效稀釋濃度（MVC）的計算：根據公式 MVC=λ/L，其中L為透明質酸素鈉注射液的細菌內毒素限值 0.05 EU/mg，λ 為鱟試劑標示靈敏度，目前市售鱟試劑靈敏度λ通常在0.50～0.03 EU/ml，則透明質酸鈉注射液的對應有效稀釋濃度為 ：C0.5=0.5/0.05 =10.000 mg/ml，C0.25=0.25/0.05=5.000 mg/ml，C0.125=0.125/0.0500=2.500 mg/ml，C0.06=0.06/0.05=1.250 mg/ml，C0.03=0.03/0.05=0.625 mg/ml。

2.3.2 預試驗：將上述系列濃度溶液記為 NPC。同時在上述NPC液中加入細菌內毒素標準溶液，使每一濃度的試驗液中均含有2λ 濃度的細菌內毒素，記此系列溶液為 PPC。取兩個不同廠家的鱟試劑，分別與上述 PPC和 NPC進行反應，每一濃度重復兩管，并設陽性和陰性對照。結果見表 2。

由預干擾試驗結果可以初步了解：兩個廠家的鱟試劑對透明質酸鈉注射液的細菌內毒素的試驗結果在 10 mg/ml 以下濃度時均無干擾。

2.4 正式干擾試驗

為了最終確認透明質酸鈉注射液是否存在干擾因素的影響，筆者進行了正式干擾試驗：取透明質酸鈉注射液用BET水分別進行稀釋，使其最終干擾試驗濃度為5 mg/ml，按2005版《中國藥典》二部附錄中的“細菌內毒素檢查供試品干擾試驗項”進行試驗，結果見表3。由表3可知，透明質酸鈉注射液在 5 mg/ml 濃度時 Es/Et 均在0.5～2.0 范圍之內，確認在 5 mg/ml 及以下濃度時無干擾。

2.5 樣品細菌內毒素檢查

按2005 版《中國藥典》中“細菌內毒素檢查法”，使用2批不同廠家的鱟試劑分別對樣品進行細菌內毒素檢查，并同時設立樣品的自身陽性對照品，結果見表4。

3 討論

由干擾預試驗結果可以初步發現，透明質酸鈉注射液在10 mg/ml以下稀釋濃度時對兩個廠家生產的鱟試劑均無干擾作用。正式干擾試驗用5 mg/ml樣品濃度且用兩個廠家的鱟試劑結果 Es/Et均在0.5～2.0 范圍之內，確認在 5 mg/ml 及

以下濃度時無干擾，限值定為 0.05 EU/mg。透明質酸鈉注射液可適用細菌內毒素檢查法，鱟試劑靈敏度應為 0.25 EU/ml 或0.25 EU/ml以上[4-8]。

參考文獻（略）

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